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SV40转染HFOB119细胞培养指南 - AG百家乐推荐

来源:平风紫 日期:2025-03-02

### SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指南

SV40转染HFOB119细胞培养指南 - AG百家乐推荐

#### 一、细胞培养条件

**细胞名称**:SV40转染人成骨细胞HFOB119

**生长特性**:贴壁生长

**冻存条件**:无血清冻存液(货号:C7001)

**培养体系**:DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS

**传代方法**:首次推荐1:2传代

**传代情况**:每2天换液

**备注**:请使用无菌离心管收集培养基,以留作过渡对比培养。若对比培养效果不佳,建议直接购买我们AG百家乐的完全培养基。

#### 二、细胞处理及运输

收到细胞后,待培养至良好状态,灌满完全培养液并封好瓶口,这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后,用75%酒精对细胞瓶进行消毒,然后在超净台内严格进行无菌操作。接着,将细胞瓶放入335℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以稳定细胞状态后再进行处理。显微镜下观察细胞生长情况,并对不同倍数的细胞进行拍照保存(最好在40x、100x、200x下各拍一张),前三天的照片是重要的售后依据,不提供照片默认细胞状态良好。(传代后建议使用原瓶的完全培养基和自配的完全培养基分别进行对比培养,并在换液后松开瓶盖。)

#### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代**:如果细胞汇合度未超80%,将完全培养液收集至离心管中,留5ml完全培养基在335℃、5% CO2孵箱继续培养;当细胞密度超过80%时,可进行传代培养,具体步骤如下:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中,放入335℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞是否大部分变圆并脱落,迅速取回操作台,轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
  3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落后吸出,将悬液转移至15ml离心管中,以1000 RPM离心5分钟,弃去上清液,再补加1-2ml完全培养基重悬。
  4. 以1:2的比例分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入335℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

**b、细胞冻存**:

  1. 当细胞覆盖率达到80%时,弃去T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml,观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,轻轻吹打使细胞脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,以1000 RPM离心5分钟。
  3. 弃去上清,加入1ml的AG百家乐无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转入冻存管中。
  4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱,若后期要转入液氮罐,需在-80℃冰箱中存放至少24小时。

**c、细胞复苏**:

  1. 从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),立即置入335℃水浴中解冻,直至无结晶生成,然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
  2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,以1000 RPM离心5分钟。
  3. 弃去上清液,再使用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于335℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
  4. 次日更换新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

在运输过程中,部分细胞可能因贴壁不牢而脱落,这属于正常现象。若脱落较多,可采取以下方法:将所有培养液收集至离心管中,以1000 RPM离心5分钟,收集上清作过渡培养(后期对比培养),沉淀中加入1-2ml胰酶,轻轻吹打重悬,以及消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应。再离心,弃去上清,加1-2ml完全培养基重悬,并以1:2比例分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后安置于335℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

#### 五、售后条款

  1. 若细胞出现问题,可重发的情况包括:运输过程中的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,或者细胞污染问题。请在收到产品48小时内提供实验结果,核实后进行重发。
  2. 若干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内大多数细胞未存活,需提供真实细胞状态照片进行重发。
  3. 若细胞活性问题在收到产品7天内呈现,需使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,核实后重发。
  4. 收到细胞当天及第2、3天需拍照,若3天未告知则视为产品合格。若4-7天内出现问题,需提供细胞前三天照片以及问题出现时的照片,经过技术人员沟通并判定后进行重发。

#### 六、细胞问题不重发的情况

  1. 若细胞污染由客户造成,将不予重发。
  2. 因客户操作不当导致细胞状态不佳,将不予重发。
  3. 使用非本库推荐培养体系亦不予重发。
  4. 细胞状态不佳且未提供前三天的照片,也不予重发。
  5. 对细胞进行了其他处理的,不予重发。
  6. 如果在收到细胞2天内未反馈问题,则不予重发。
  7. 最终决定将视具体情况而定。
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