AG百家乐推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有多项优越特点：

产品特点

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
2. 经过优化的引物和其他组分，具备高灵敏度。
3. 提供阳性对照，帮助有效区分假阴性样品。
4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的保守区域，确保无交叉反应。
5. 同时支持定性和定量检测；定量检测的线性范围至少可达到五个数量级。
6. 产品足以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 该产品仅供科研使用。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

采用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与大多数市场核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度较高，以下稀释操作需在独立区域进行，以避免污染样品或本试剂盒其他成分：

1. 标记6个离心管，分别标为7、6、5、4、3、2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O（最好使用带芯枪头）。
3. 在7号管中加入5μL的1×10E8拷贝/μL阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL的1×10E7拷贝/μL阳性对照，震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
5. 重复以上操作直至获得6个不同稀释度的标准曲线样品，如不需制作标准曲线，则将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

准备N+2个qPCR管（包括待检样品N个、1个阴性对照和6个阳性对照），然后分别将以下成分添加到各PCR管中（详细信息可向我司索取）。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中分别加入2μL模板，顺序为：阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪样品槽内，进行扩增，扩增程序请参阅详细说明书。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，则以阳性对照浓度的对数值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，并根据待测样品的Ct值推算出样品DNA浓度的对数值。
2. 若未制作标准曲线，依据以下标准判定结果：
- 阳性对照：Ct值<30，出现明显指数增长，呈“S”型曲线。
- 阴性对照：Ct值为38或无Ct值，无明显的指数增长与平台期。
- 样本检测结果：Ct值<35，表现出明显的指数增长，表明样本中存在婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值为38或无Ct值，则表示样本中未检测到婴儿利什曼虫，结果为阴性；Ct值在35-38区间需复检，重复实验结果仍在该范围而有明显指数增长，则判定为阳性，反之则为阴性。

运输与保存

本产品需低温运输，建议在-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。

选择AG百家乐的检测试剂盒，让您的实验更高效、安全。