### 人β干扰素 (IFN-β) Elisa试剂盒使用说明

本试剂盒仅限于科研用途，不可用于医学诊断。

### 试剂盒原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法进行酶联免疫吸附试验（ELISA）。首先，将样本、标准品及HRP标记的检测抗体依次加入预先包被adropin (AD)抗体的微孔中。经过温育及充分洗涤后，底物TMB在过氧化物酶的催化下发生显色反应，生成蓝色，最终在酸性条件下转变为黄色。反应颜色的深浅与样品中的adropin (AD)浓度成正比。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），以计算样本浓度。

### 样品收集、处理及保存方法

1. **血清**：使用不含热原和内毒素的试管。操作过程中避免任何细胞刺激。收集血液后，以3000转离心10分钟迅速分离血清与红细胞。

2. **血浆**：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清。

3. **细胞上清液**：以3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. **组织匀浆**：将组织加入适量生理盐水进行捣碎，随后以3000转离心10分钟取上清。

5. **保存**：如未及时检测样本，请按一次用量分装并冻存于-20℃，避免反复冻融，确保在室温下解冻并充分混匀。

### 自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头（05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL）

3. 37℃恒温箱

### 操作注意事项

1. 试剂盒需在2-8℃保存，使用前需要在室温下平衡20分钟。如发现浓缩洗涤液结晶，属于正常现象，可通过水浴加热使其完全溶解。

2. 实验中未用的试剂应立即密封保存。

3. S0号标准品（0浓度）可视为阴性对照；样本在操作中已被稀释5倍，最终实验结果需乘以5以得出实际浓度。

4. 严格依据说明书中的时间、加液量及顺序进行温育。

5. 在使用前对所有液体组分进行充分摇匀。

### 试剂盒组成

| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |

|--------------------|-------------------|-------------------|--------------|

| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |

| 标准品 | 03mL×6管 | 03mL×6管 | 无 |

| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |

| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |

| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书稀释 |

| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |

| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |

| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |

| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |

| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |

| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、25、50、100、200、400pg/mL。

### 试剂的准备及洗板方法

**20×洗涤缓冲液的稀释**：按1：20比例用蒸馏水稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

1. **手工洗板**：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩尽，再用吸水纸拍干，重复5次。

2. **自动洗板机**：每孔注入洗液350μL，浸泡1分钟，洗板5次。

### 操作步骤

1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，其余试剂用自封袋密封，再放回4℃。

2. 设置标准品和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 向样本孔中先加入待测样本10μL，然后添加样本稀释液40μL；空白孔不添加任何液体。

4. 除空白孔外，标准品和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，封住反应孔，在37℃水浴或恒温箱中温育60分钟。

5. 丢弃反应液，用吸水纸拍干后，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去，再用吸水纸拍干，重复5次（可使用洗板机）。

6. 每孔中加入底物A、B各50μL，避光在37℃孵育15分钟。

7. 每孔中加入终止液50μL，在15分钟内测定各孔的OD值，波长为450nm。

### 结果判断

绘制标准曲线：在Excel中将标准品浓度作为横坐标，对应的OD值作为纵坐标，绘制标准品线性回归曲线，根据曲线方程计算样本浓度值。

### 试剂盒性能

1. **准确性**：标准品线性回归的相关系数R值大于或等于0.9900。

2. **灵敏度**：最低检测浓度小于10pg/mL。

3. **特异性**：不与其他可溶性结构类似物发生交叉反应。

4. **重复性**：在板内及板间变异系数均小于15%。

5. **贮藏**：在2-8℃条件下避光防潮保存。

6. **有效期**：6个月。

### 免责声明

1. 本试剂盒仅用于科研目的，禁止用于临床或人体试验，所产生的后果由实验者自行承担，AG百家乐对此不承担任何责任。

2. 实验者必须严格遵照说明书进行操作，若违反，将对此后果负全部责任。